生体組織用フラットセル(LC20)を使った生体ラジカル(bioradical)の測定例

てんかん発作誘発作用をもつ2-carboxy-4-Isopropenyl-3-pyrrolidineacetic acid monohydrate(カイニン酸)をマウスに投与し、発作後の大脳海馬周辺組織におけるラジカルの生成を生体組織用フラットセル(LC20)とESR分光装置：JES-FA200を使って観測しました。てんかん発作後、 Glowinski-Iversenらの方法に沿ってマウス大脳海馬周辺の組織を氷冷下、セル(LC20) のステージにのせ、活性酸素を捕捉するスピントラッピング試薬5,5-Dimethyl-1-pyrrolin-N-Oxide (DMPO)を添加後、カバーグラスで固定したあとESRの測定部にセットしました。その結果、カイニン酸を投与していないマウスの海馬では、小さなアスコルビン酸ラジカル(As^-.)のシグナルがg = 2.0048の位置に確認され(a)、一方、てんかん発作を誘発させた海馬では、 As^-.の信号が投与しないマウスより大きくなり、さらにDMPOが活性酸素を捕捉したシグナルも観測されました(b)。シミレーションプログラムを用いて、DMPOのスペクトルを検討したところ、スーパーオキシドアニオンラジカルをDMPOが捕捉したスペクトルであると確認できました(c)。なお、ラットの実験の場合では、過酸化脂質ラジカル生成が確認されており、ラジカル反応のメカニズム解明に期待がかかります。

掲載データの詳細

T. Masumizu, Y. Noda, A. Mori, L. Packer Electron spin resonance assay of ascorbyl radical generation in mouse Hippocampal slices during and after kainite-induced seizures. Brain Research Protocols 2005;16:65-69

参考文献

1. Glowinski J, Iversen L. Regional studies of catecholamines in the rat brain. I. The disposition of [³H]norepinephrine, [³H]dopamine and [³H]DOPA in various regions of the brain. J Neurochem 1966; 13:655–669.
2. Mori A, Noda Y, Packer L. The anticonvulsant zonisamide scavenges free radicals. Epilepsy Res, Epilepsy Res. 1998; 30: 153-158.
3. Toyokuni S, Masumizu T, Ozeki M, Kondo S, Hiroyasu M, Kohno M, Hiai H.,An electron spin resonance study on alkylperoxyl radical in thin-sliced renal tissues from ferric nitrilotriacetate-treated rats: the effect of alpha-tocopherol feeding., Free Radic Res. 2001 Sep;35(3):245-55.