BioMajesty™ の超微量分析への対応：超微量分析装置BioMajesty™　検体前希釈機構の有用性

平成 13 年度四国臨床衛生検査技師会合同研修会日本臨床検査自動化学会第 32 回大会・機器試薬セミナーでの発表内容です。

平成13年度四国臨床衛生検査技師会合同研修会（会場：香川医科大学）シンポジウムで発表。

小児・新生児など著しく採血量に制限のある患者への対応や、新薬・ゲノムの機能解析等で利用される実験小動物（特にマウス/ラット）などの微量検体の検査に対応することを目的として分析条件の検討を行いました。BioMajestyに共通する検体前希釈機構を有効に活用し、サンプルカップ等の検体ロス量をすべて含み、僅か50µl血清で21項目の分析が可能となりました。

1. BioMajesty Series

JCA-BM 1250	800test+ISE450test
JCA-BM 1650	1200test+ISE450test
JCA-BM 2250	1800test+ISE450test
JCA-BM 9030	1200test+ISE450test 血球自動溶血機能
L-800（JCA-BM9010）	800test （感染症項目）特殊洗浄機能

2. BioMajestyシリーズ各部の動きについて

動画で各部の動きを見ることができます。
ピペット	DPP洗浄
セル洗浄	攪拌

3. 今後の自動分析装置に求められるもの

経済性の強化
高速処理能力→保有台数減、迅速結果報告
メンテナンス軽減→人件費節約
多機能化→免疫・感染症項目の測定→装置の集約化
小児/新生児など微量検体への対応

4. BioMajestyシリーズの免疫項目への対応

幅広いアプリケーション⇒免疫ラテックス専用機項目の対応

希釈ターンテーブルによる検体前処理機能
自由に選択できる検体前処理液
湾曲し、不安定なタイムコースを追跡できる測光点
BM1250　64ポイント、BM1650 98ポイント、BM2250 41ポイント
免疫試薬ロット間活性を補正するIMA
現行免疫専用機に匹敵するプロゾーンチェック機能
希釈ターンテーブルを利用し、元検体不要の自動再検
反応時間延長　BM1250　31分、BM1650/2250　21分

5. 測光ポイントの比較

120sec Rate Assay 30sec Prozone Check

6. 不活性オイル、ACUA20による恒温糟メンテナンス軽減

熱媒体に比重の大きいACUA20を使用するメリット

温度勾配が少なく、気泡の付着が殆ど無い
光路の安定化
温度の均一化
水垢、異臭が無い
恒温槽のメンテナンスは不要

7. 高精度データの提供

高精度ダイレクトモータ使用、回転反応器の静止誤差は1/2400mm
ピペッティング時のキャリーオーバー低減
セル残水　0.1ul
恒温槽に不活性オイル‘ACUA’使用、
光路と反応液温度を安定化
回転往復同時攪拌で、反応液を均一化
サンプルへの着液は原則として1回

8. BMシリーズのキャリーオーバー率

サンプリングプローブ		0.00052％　以下
希釈プローブ		0.00013％　以下
第1、第2試薬プローブ	各	0.000074％　以下
希釈ディスク攪拌棒		0.00028％　以下
第1、第2攪拌棒		各0.000067％　以下
セル残水		0.18ul

9. 希釈ディスクからの自動再検

自動再検は

⇒サンプルターンテーブルからの再検（元試料）
⇒希釈ターンテーブルからの再検（希釈済み試料）

が選択可能です。

分析試料（希釈後試料）
・分注量：2～25µL（0.1µLステップ）
自動再検
・再検検体：希釈ディスク上の1次希釈検体
・再検再希釈：1～75倍（項目ごと）
・再希釈液：生理食塩水（標準）、項目専用希釈液
・再検分析試料量：2～25µL（0.1µLステップ）

10. 超微量検体への対応（BioMajesty全機種共通）

希釈ターンテーブルの有効活用　特殊希釈条件

元検体の希釈倍率を大きくし、検体使用量を低減します。

【通常（5倍希釈）の条件では】
元検体：30µl + 希釈液：120µｌ＝希釈後検体：150µl
希釈後検体から各項目の分析に必要な分がサンプリングされます。

【特殊（10倍希釈）の条件では】
元検体：15µｌ + 希釈液：135µl ＝希釈後検体：150µl
希釈後検体から各項目の分析に必要な分がサンプリングされます。

【特殊（25倍希釈）の条件では】
元検体：6µｌ + 希釈液：144µｌ　＝希釈後検体：150µｌ
希釈後検体から各項目の分析に必要な分がサンプリングされます。

希釈ターンテーブルの有効活用　検体ロス量

JCA-BMシリーズでの検体ロス量の算出

【DTT（希釈用）セルロス量】
希釈後検体：150µｌ内 DTTセルのロス分35µｌを差し引いた分115µｌ（2回サンプリング時は 150×2-35＝265µｌ）が分析に使用できます。

【SPP（希釈後検体用）ピペットのロス量】
サンプリング毎に 3µｌのロスが発生します。

【DPP（元検体用）ピペットのロス量】
基本的には希釈水で押し出すためロスはありません。

【検体カップのロス量】
BM純正カップのB型カップでは、公証値 50µｌです。
（今回実測した結果約15µｌ：各号機ごとに実測の必要あり）

希釈ターンテーブルの有効活用　検討試薬一覧

項目		試薬メーカー名	試薬名	Lot.No.R1	Lot.No.R2
1	TP	関東化学	シカオートTP	1N1211	-
2	ALB	関東化学	シカオートALB	1L0211	-
3	AST	関東化学	シカリキッドAST	1R1281	1R1031
4	ALT	関東化学	シカリキッドALT	1Q0571	1R581
5	LDH	関東化学	シカリキッドLDH	1Q1251	1Q1261
6	ALP	関東化学	シカリキッドALP	1R0201	1Q0491
7	GGT	関東化学	シカリキッドGGT	1R0641	1S0521
8	CPK	関東化学	シカリキッドCPK	1Q0182	1P0142
9	AMY	関東化学	シカリキッドAMY-1R	1R0541	-
10	UA	関東化学	シカリキッドUA	1L1061	1M0961
11	Fe	関東化学	シカリキッドFe	D0Y81	101111
12	Ca	関東化学	シカオートCa	1P0551	1P0542
13	ChE	栄研化学	EJ テスト ChE 栄研	14101	16102
14	CHO	栄研化学	エクディアL栄研CHO	16103	16104
15	TG	栄研化学	エクディアL栄研TG	15103	15102
16	HDL	協和	デタミナーL	220DAG	301CAG
17	CRE	セロテック	CRE-S	10701	10701
18	BUN	ニットーボー	N-アッセイBUN-L	D135A	A133A
19	CRP	ニットーボー	アッセイ TIA CRP	G145A	E151A
20	TBIL	和光	E-HRワコー	DQ603	DP006
21	DBIL	和光	E-HRワコー	EF317	DR187

希釈ターンテーブルの有効活用　分析条件一覧

JCA-BM1650　希釈分析条件一覧表（5倍・10倍・25倍）

項目		5倍希釈（µl）		10倍希釈（µl）		25倍希釈（µl）		SV	R1	R2
項目		元希釈	希釈液	元希釈	希釈液	元希釈	希釈液	µl	µl	µl
1	TP	30	120	15	135	6	144	4	90	**
2	ALB	30	120	15	135	6	144	3	90	**
3	AST	30	120	15	135	6	144	20	90	30
4	ALT	30	120	15	135	6	144	20	90	30
5	LDH	30	120	15	135	6	144	9	80	20
6	ALP	30	120	15	135	6	144	4	80	20
7	GGT	30	120	15	135	6	144	10	90	30
8	CPK	30	120	15	135	6	144	9	80	20
9	AMY	30	120	15	135	6	144	7.7	100	**
10	UA	30	120	15	135	6	144	9	90	30
11	Fe	30	120	15	135	6	144	20	80	32
12	Ca	30	120	15	135	6	144	6	80	20
13	ChE	30	120	15	135	6	144	3.8	80	20
14	CHO	30	120	15	135	6	144	6.2	80	40
15	TG	30	120	15	135	6	144	4.6	80	40
16	HDL	30	120	15	135	6	144	5.4	90	30
17	CRE	30	120	15	135	6	144	6.7	80	20
18	BUN	30	120	15	135	6	144	13	80	27
19	CRP	30	120	15	135	6	144	20	80	15
20	TBIL	30	120	15	135	6	144	10	80	20
21	DBIL	30	120	15	135	6	144	10	80	20

【Total SV】201µl
【SPP　ロス量】21×3＝63µl
【DTT　ロス量】35µl
【21項目分析時必要希釈後検体量（SV）】201+63+35＝299µl

よって元検体を2回サンプリングします。

希釈ターンテーブルの有効活用　希釈条件別再現性一覧

JCA-BM1650　希釈条件別同時再現性一覧表（pool serum）

項目		5倍希釈（µl）			10倍希釈（µl）			25倍希釈（µl）
項目		mean	range	C.V	mean	range	C.V	mean	range	C.V
1	TP	5.5	0.1	0.915	5.5	0.1	0.461	5.4	0.2	1.023
2	ALB	3.8	0	0.000	3.8	0	0.000	3.9	0.1	0.469
3	AST	88.9	2	0.506	93.5	2	0.611	107.8	5	1.144
4	ALT	107.1	1	0.323	107.5	1	0.473	116.3	4	1.067
5	LDH	125.9	3	0.819	125.8	3	0.783	125.1	15	2.588
6	ALP	173.2	4	0.447	170	12	1.529	176.1	27	2.984
7	GGT	45.8	1	0.827	46.2	2	1.229	42.5	5	3.597
8	CPK	76	4	1.360	74.9	5	1.744	72.1	23	5.832
9	AMY	102.6	1	0.491	103.3	2	0.670	104.4	6	1.295
10	UA	3.3	0.1	0.553	3.3	0	0.000	3.3	0.1	1.143
11	Fe	125.9	3	0.508	120.8	3	0.677	114.8	20	4.379
12	Ca	8.6	0.2	0.504	8.7	0.3	0.792	8.8	0.4	1.278
13	ChE	1484.3	36	0.727	1484.1	35	0.630	1493.5	45	0.792
14	CHO	115.3	2	0.464	115.9	3	0.743	118.6	5	1.304
15	TG	97.2	1	0.390	99.1	2	0.687	97	3	0.877
16	HDL	41	2	0.641	43.5	1	1.169	47.4	2	1.188
17	CRE	1.2	0.05	1.155	1.2	0.1	1.569	1.3	0.1	1.742
18	BUN	13.8	0.3	0.588	13.7	0.5	0.939	13.9	1.7	2.678
19	CRP	1.20	0.05	0.992	1.20	0.09	1.924	1.17	0.46	8.853
20	TBIL	0.4	0	0.000	0.4	0	0.000	0.4	0.1	4.527
21	DBIL	0.2	0	0.000	0.2	0	0.000	0.2	0.1	16.210

希釈ターンテーブルの有効活用　希釈条件別相関

酵素項目：ALP（JSCC）


X軸：標準機釈（5倍） Y軸：10倍希釈 Y＝0.977X-0.658 相関係数＝0.9992	X軸：標準機釈（5倍） Y軸：25倍希釈 Y＝0.965X+0.783 相関係数＝0.9966

脂質項目：HDL-C


X軸：標準機釈（5倍） Y軸：10倍希釈 Y＝1.022X-1.301 相関係数＝0.9977	X軸：標準機釈（5倍） Y軸：25倍希釈 Y＝1.039X-2.414 相関係数＝0.9954

免疫項目CRP（TIA）


X軸：標準機釈（5倍） Y軸：10倍希釈 Y＝0.987X-0.01 相関係数＝0.9996	X軸：標準機釈（5倍） Y軸：25倍希釈 Y＝1.005X-0.243 相関係数＝0.9983

希釈ターンテーブルの有効活用　サンプルカップロス量の実測

【B型サンプルカップのロス量確認】

10倍希釈条件で元検体のB型カップ分注量を 40・45・50µl とし　21項目の分析が n＝10 すべてのカップで正常に行えた分注量から分析で使用された血清量を差し引き、その残りを実測ロス量としました。

40µlでは10サンプルのうち2サンプルのみ実測可能で、45・50µlでは10サンプル全てが正常に分析できました。

よって　45-15ｘ2＝15µl　がB型サンプルカップのロス量となりましたが、機種ごとで変動が考えられますので実測を行うことが不可欠です。

(公証保証値：純正Bカップで　50µlです。)

希釈ターンテーブルの有効活用　サンプルカップロス量の実測

BioMajesty　純正B型サンプルカップ　左から
15µL　50µL　100µL　の検体を分注。

希釈ターンテーブルの有効活用　まとめ

BioMajestyに共通する検体希釈ターンテーブルを有効に活用することにより、新生児など著しく採血量に制限のある患者への対応が可能です。

また、新薬開発・ゲノムの機能解析実験などで利用されるマウスなど実験小動物のスクリーニング検査などに有用であることが確認されました。 10倍希釈条件で21項目を分析する場合では、約1.4µl/項目と非常に微量な検体量で測定できる事が実証されました。

JCA-BM9030では、希釈ターンテーブルをHbA1cの検体前処理に応用するなど、希釈ターンテーブルにはまだまだ有効な使い道が隠されているように思います。

検体前希釈機構による5倍希釈（標準）、10倍希釈ではいずれの項目も精度良く測定できました。25倍希釈では一部の項目、特に実行感度の低い酵素項目を除いてほぼ満足できる結果が得られました。

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