浸漬固定

immersion fixation

SEMで生物試料を観察するために行う化学固定法の一種で、最も一般的に用いられている。
細胞や生体から摘出した組織などを直接固定液に浸漬することで、タンパク質やリン脂質を固定する。まず、タンパク質を固定するために、パラホルムアルデヒド水溶液（濃度4.0 %程度）やグルタールアルデヒド水溶液（濃度1.0～2.5 %程度）に1時間以上浸漬する（前固定）。パラホルムアルデヒドは試料への浸透速度が速く、グルタールアルデヒドは固定力が強いので、両者の混合液を使用することが多い。生体から摘出した組織の場合、固定液の浸透を良くするために小さく切り出し（5mm角以下）、緩衝液で洗浄した後、速やかに固定液に浸漬する。次に、生体膜を構成するリン脂質を固定するために、四酸化オスミウム水溶液（濃度1 %程度）に1時間程度浸漬する（後固定）。
四酸化オスミウムは、試料への浸透速度が遅く、またタンパク質を破壊してしまうため、浸透速度が速くタンパク質を固定するアルデヒド固定を先に行う。

Immersion fixation is one of chemical fixation methods for scanning electron microscope (SEM) observation of biological specimens. The method is most widely used for chemical fixation.
In the method, the specimens such as cells and tissues extracted from living organisms are directly immersed into a fixation solution, and proteins or phospholipids in the specimens are fixed.
First, to fix proteins, the specimens are immersed in a paraformaldehyde solution (concentration: about 4.0%) or a glutalaldehyde solution (concentration: about 1.0 to 2.5%) for one hour or longer (pre-fixation). Since paraformaldehyde has high penetration rate into the specimen and glutalaldehyde has high fixation strength, a mixed solution of both chemicals is used in many cases. (For tissues extracted from living organisms, they are cut into small pieces (5 mm square or less) to improve the penetration of the fixation solution. After washing them in a buffer solution, they are rapidly immersed in the fixation solution.) Next, to fix phospholipids of biological membranes, the specimens are immersed in an osmium tetroxide solution (concentration: about 1.0%) for approximately one hour (post-fixation).
It should be noted that the fixation of the proteins by aldehyde (high penetration rate) is carried out in advance of the fixation of the phospholipids because osmium tetroxide has low penetration rate into the specimen and can destroy the proteins.